完整的流式细胞术检测样本设置

1.直接标记样本
对于直接标记单色样本，应该设置空白对照、阴性对照（同型抗体对照）和待测样本。对于直接标记多色样本，则应该设置空白对照、阴性对照（同型抗体对照或FMO对照）、补偿对照和待测样本。
2.间接标记样本
对于间接标记单色样本，应该设置空白对照、阴性对照（一抗同型抗体对照）和待测样本。在实际工作中若无一抗的同型抗体对照，则至少应该设置不加一抗、只加二抗作为阴性对照来代替。
3.多色样本
在流式细胞术分析过程中，选择正确的对照几乎是实验中最重要的步骤。没有正确的对照，不管实验结果具有怎样重大的意义，实验数据也只是数字垃圾，没有任何意义。以FITC/PE/PE-Cy5三色为例，可设置同型抗体（ISO）对照体系与FMO 对照体系，其设置方法与作用比较见表

序号

ISO对照体系

FMO对照体系

1

空白对照

调节细胞、仪器背景

空白对照

调节细胞、仪器背景

2

FITC+

即为补偿对照：
1.调节荧光补偿
2.阴、阳性界定参考

FITC+

即为补偿对照：
1.调节荧光补偿
2.阴、阳性界定参考

3

PE+

PE+

4

PE-Cy5+

PE-Cy5+

 

 

5

 

FITC-ISO

FITC同型抗体对照：
1.确定FITC荧光抗体非特异性信号
2.阴、阳性界定参考

 

FITC-PE+PE-Cy5+

FITC-FMO对照：
1.消除荧光溢漏现象
2.用于界定表达PE、PE-Cy5荧光信号四种组合细胞上FITC的荧光阈值

 

 

6

 

 

PE-ISO

PE同型抗体对照：
1．确定PE荧光抗体非特异性信号

2．阴、阳性界定参考

FITC+PE-PE-Cy5+

PE-FMO对照：

1．消除荧光溢漏现象
2．用于界定表达FITC、PE-Cy5荧光信号四种组合细胞上PE的荧光阈值

 

 

7

 

 

PE-Cy5-ISO

PE-Cy5同型抗体对照：

1．确定PE-Cy5荧光抗体非特异性信号

2．阴、阳性界定参考

FITC+PE+ PE-Cy5-

PE-Cy5-FMO对照：
1．消除荧光溢漏现象
2．用于界定表达FITC、PE荧光信号四种组合细胞上PE-Cy5的荧光阈值

 

 

8

 

FITC-ISO +PE-ISO+PE-Cy5-ISO

 

 

混合同型抗体对照

FITC-ISO+ PE+PE-Cy5

FMO/ISO 复合对照体系

9

FITC+PE+PE-Cy5

待测标本

 FITC+PE+PE-Cy5

待测标本

 

 

 

 

10

ISO对照体系：

1．确定各荧光抗体非特异性信号

2．可作为阴、阳性界定参考；若结合各自的补偿对照，可部分消除荧光溢漏现象，用于阴、阳性界定

3．无法精确界定表达任意两种荧光信号组合的细胞上第三种荧光信号的荧光阈值

FMO对照体系：

1．无须结合补偿对照，可用于界定表达任意两种荧光信号组合的细胞上第三种荧光信号的荧光阈值

2．常规FMO对照不能确定各荧光抗体非特异性信号

3.FMO/ISO复合对照体系既可用于界定特异性荧光信号的荧光阈值，又可确定各荧光抗体非特异性信号